|
Дифференциальное окрашивание по Граму
Метод окрашивания описан согласно требованиям Приказа № 109 с использованием материалов «Руководства по клинической микробиологии» Балоуза, Хауслера, Херрмана, Айзенберга и Шадоми, пятое издание, 1991 год, издательство ASM, Вашингтон. Грам-окрашивание позволяет дифференцировать бактерии по различиям в свойствах клеточной стенки.
Метод:
- приготовить гомогенный мазок, который может быть изготовлен напрямую из культуры, бактериальной суспензии, гомогената 1–2 колоний в физ.растворе или из образца, взятого непосредственно у пациента; - оставить сохнуть и прогреть мазок для завершения процесса фиксации; - окрашивать препарат генцианвиолетом в течение 1 мин, налив краситель поверх мазка или погрузив мазок в краситель; - промыть водой; - аналогичным образом окрасить препарат люголем в течение 1 минуты, промыть водой; - промыть в ацетон-спиртовой смеси; промыть водой; - дифференцирующую окраску сафранином провести так же, как окраску генцианвиолетом и люголем, в течение 1 минуты; - промыть водой, пока та не станет бесцветной; - высушить при комнатной температуре; - микроскопировать с каплей синтетической иммерсии.
Грам-позитивные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый, а грам-негативные – в розовый цвет.
Дифференциальное окрашивание по Цилю–Нильсену
Метод окрашивания описан по «Руководству по клинической микробиологии» Балоуза, Хауслера, Херрмана, Айзенберга и Шадоми, пятое издание, 1991 год, издательство ASM, Вашингтон.
Дифференциальный метод Циля–Нильсена позволяет разделять бактерии с различным сродством к красителями, в частности, позволяет отделить кислотоустойчивые бактерии (в частности – микобактерии туберкулеза).
Метод:
- приготовить гомогенный мазок, который может быть изготовлен напрямую из культуры, бактериальной суспензии, гомогената 1–2 колоний в физ. растворе или из образца, взятого непосредственно у пациента; - оставить сохнуть и прогреть мазок для завершения процесса фиксации; - разместить поверх мазка кусочек фильтровальной бумаги, по размеру меньший, чем предметное стекло, но полностью закрывающий мазок; - налить на бумагу основной карболовый фуксин (1%); - осторожно нагреть до появления белого пара, но избегая кипения, повторить операцию 2–3 раза; - смыть водой фильтровальную бумагу и избыток красителя; - залить препарат Эбнеровским спиртом (3% HCl + 97% C2H5OH), немедленно вынуть препарат и промыть водой; - докрасить метиленовым синим в течение 1-2 мин; - смыть водой избыток красителя, пока вода не перестанет окрашиваться; - высушить при комнатной температуре; - микроскопировать с каплей синтетической иммерсии.
Кислотоустойчивые бактерии (в т.ч. микобактерии туберкулеза) окрашены в красный цвет, остальные бактерии окрашены в синий цвет.
Окраска метиленовым синим
Простая окраска метиленовым синим позволяет наблюдать бактерии благодаря их интенсивному синему окрашиванию. Метод также очень удобен для выявления метахроматических гранул Corynebacterium diphtheriae.
Метод:
- приготовить гомогенный мазок, который может быть изготовлен напрямую из культуры, бактериальной суспензии, гомогената 1–2 колоний в физ. растворе или из образца, взятого непосредственно у пациента; - оставить сохнуть и прогреть мазок для завершения процесса фиксации; - окрасить мазок путем погружения или заливки метиленовым синим; - промыть водой до полного снятия остатков краски (вода остается чистой); - высушить при комнатной температуре; - микроскопировать с каплей синтетического иммерсионного масла.
Бактерии окрашены в синий цвет.
|
)
